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Interacciones biofísicas

El objetivo de este servicio es la caracterización biofísica de los productos finales preparados dentro del Instituto. Entre estas pruebas se incluyen la determinación de constantes de afinidad entre el ligando y el objetivo biológico, mediciones de permeabilidad a través de diferentes membranas celulares, estudios de unión a transportadores clave (PgP) o a proteínas plasmáticas, junto con estudios adicionales que permiten la caracterización de las propiedades similares a las de los fármacos de los compuestos preparados.

El servicio incluye:

  • Un equipo de Resonancia de Plasmones Superficiales (SPR), Biacore X-100.
  • Equipos de Calorimetría de Titulación Isotérmica (nanoITC), Microcal PeaQ-ITC.

Ambos dispositivos permiten la detección y el monitoreo de interacciones entre dos o más moléculas (proteína-proteína, proteína-molécula pequeña, péptido-péptido y ADN-molécula pequeña) en tiempo real sin utilizar ningún tipo de marcaje. Pueden determinar la especificidad y caracterizar la cinética, afinidad (Kd), entalpía y entropía de la interacción.

 

  • Otros equipos complementarios: equipos para determinar la calidad y el estado funcional de las proteínas (Tycho NT.6). Este utiliza la medición basada en fluorescencia intrínseca con aumento de temperatura (Nano DSF, Tycho NT6). El perfil del estado plegado o desplegado es único para cada proteína, lo que proporciona la información necesaria sobre la calidad de la muestra. Con este equipo, se puede determinar la funcionalidad de las proteínas en presencia de sus ligandos, las impurezas de la muestra y las discrepancias entre dos lotes de muestras de proteínas. Además, discrimina entre los buffers más adecuados para la preservación de proteínas y establece sus condiciones de almacenamiento. Es particularmente útil en los ensayos de SPR e ITC, donde las condiciones iniciales en las que se llevan a cabo los experimentos a menudo determinan el resultado final.
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